理科授業

　３年生、生物の選択クラスで、ｐGLOバクテリア遺伝子組み換えキットを使った、遺伝子導入実験を行いました。

生徒の感想　　(３年６組　　滝澤樹乃　　行田市立西中学校出身）

　今回は２日間にかけて遺伝子組み換えの実験をしました。この実験は、故意に、大腸菌が持っていない遺伝子を取り込ませ（遺伝子導入）、その新しい遺伝情報を大腸菌内で発現させるというものです。

　遺伝子組み換えは、世の中に存在しない生物を生み出すので、取り扱いがとても重要です。言葉で表すとすぐできるように感じてしまうでしょう。実際は、５０分でやるのは難しく、いかに班員で協力してスピーディーに取り組むことが大切かを実感しました。

　また、今回は初めて少量の液体を測り取りました。まだまだ使ったことのない器具もあるので、今後の実験で新しいことをやるのが楽しみです。

 

 

この実験では、生物発光するクラゲのGFP（紫外線を当てると、鮮やかな緑色の光を発するタンパク質）の遺伝子を専用の大腸菌に取り込ませ、GFPを持つ大腸菌（紫外線を当てると緑色に光る大腸菌）を作り出します。

最初に机や手を消毒します。

専用の大腸菌を培養したプレートより大腸菌をチューブに取ります。

つぎに、pGLO（GFP遺伝子を含んだプラスミド）溶液からプラスミドを取り大腸菌に加えます。(＋DNA)

この時、コントロールとしてプラスミドを加えないものも用意します。(ーDNA）

氷上で１０分ほど静置した後、４２℃のお湯に５０秒間付け、氷上に戻し２分間静置します。(ヒートショック）

そのあと大腸菌の栄養となるLB培地を加え１０分ほど室温で放置します。ここで大腸菌はプラスミドを取り込んでいるはずです。

その間に、プラスミドDNAに紫外線を当てて光るかどうかの確認をしました。

DNAだけでは緑色に光りません。

遺伝子導入した大腸菌と、導入していない大腸菌を寒天培地のプレートにまき、ひとまとめにして３７℃で一日培養します。

次の日、培養したプレートを取り出し、観察します。

UVライトボックスに入れて、覗くとGFP遺伝子が発現したものだけが、緑色に光っています。

△左上と右下のプレートは、遺伝子導入をしていないもの（－DNA）、左下と右上は遺伝子導入をしたもの（＋DNA）です。左下のプレートだけが、GFPを作り緑色に発光しています。

最後に机と手を消毒し、使用した器具なども滅菌して処分します。バイオハザードを起こさないために！